大鼠Clara细胞分泌蛋白CC16基因的克隆和原核表达及纯化

作者：庞敏; 杜永成; 蒋毅; 刘志宏; 张彩苹; 陈丽丽; 王海龙

来源：环境与健康杂志, 2013, (04): 290-294.

DOI：10.16241/j.cnki.1001-5914.2013.04.015

• 大鼠Clara细胞分泌蛋白
• 原核表达
• 亲和纯化
• 免疫印迹 Rat Clara cell secretory protein(CC16)
• Prokaryotic expression
• Affinity purification
• Western blotting

目的克隆大鼠Clara细胞分泌蛋白(CC16)基因,原核表达并纯化重组的CC16蛋白,为进一步研究CC16蛋白的功能及对炎症性气道疾病的治疗作用奠定基础。方法制备大鼠肺组织总RNA,根据大鼠CC16基因全长编码序列(GenBank登录号:NM_013051)的开放阅读框设计引物并进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接入pET30a(+)载体,重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli DH5α),阳性菌落经PCR和双酶切鉴定并测序。将重组质粒pET30a(+)-rCC16转化至E.coli Rosetta(DE3)并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基...

• 出版日期2013
• 单位山西医科大学; 山西医科大学第一医院; 山西省人民医院