口蹄疫病毒O型阻断ELISA抗体检测方法的建立

作者：张国春; 李静; 叶玲玲; 罗倩敏; 李瑶瑶; 董仙兰; 邹丰才; 艾军^*

来源：中国口岸科学技术, 2022, 4(S1): 51-56.

• 口蹄疫病毒O型
• 阻断酶联免疫吸附试验
• 试剂盒

利用口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus type O,FMDV-O）VP1特异性蛋白为抗原，杂交瘤细胞7E3分泌单克隆抗体，建立一种检测FMDV-O型的阻断酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）方法。对ELISA反应条件进行优化：抗原包被浓度为48.4 g/mL，单抗稀释度为28.0 g/mL，羊抗鼠酶标二抗（Sheep anti-mouse enzyme-conjugate secondary antibody,IgG-HRP）最佳稀释度为1 g/mL，底物液反应时间为37℃避光显色15 min。ELISA结果的判定标准为：血清阴断率<57%判为阳性，血清阻断率≥57%判为阴性。本研究建立的ELISA方法能与FMDV-O型阳性血清进行特异性反应，而与水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus,VSV），口蹄疫亚洲I型病毒（Foot and Mouth Disease virus type Asia1,FMDV-Asia1），羊痘病病毒（Sheep pox virus,QRF），口蹄疫A型病毒（Foot and mouth disease virus type A,FMDV-A），蓝舌病病毒（Bluetongue virus,BTV），小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus,PPRV），赤羽病病毒（Akabane virus,AKV）的阳性血清无交叉反应性。ELISA的重复性试验表明，批间和批内的变异系数均小于10%。比较试验结果表明，该ELISA的相对敏感性和特异性分别为88.9%和100%，与金迈诗口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒的符合率为93.75%。综上所述，本试验建立的口蹄疫病毒O型阻断ELISA抗体方法具有特异、稳定、灵敏的优点，为建立标准化的检测试剂盒奠定了基础。

• 出版日期2022
• 单位云南农业大学