禽流感病毒荧光免疫层析检测试纸条的研制

作者：孙洁; 陈兵; 杨春华; 吴峰; 陈雨; 郑晓聪; 王津津; 陶虹; 丁晶; 于力; 秦智锋^*

来源：上海畜牧兽医通讯, 2019, (04): 2-7.

DOI：10.14170/j.cnki.cn31-1278/s.2019.04.001

• 禽流感病毒
• 荧光免疫层析检测试纸条
• 检测

禽流感是重要的人兽共患病,建立现场快速灵敏的检测方法是防控其发生和流行的前提和基础。本研究采用不同亚型流感毒株交叉免疫小鼠法来免疫小鼠,通过多个亚型的NP表达蛋白来筛选杂交瘤阳性细胞株,获得分泌针对NP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞4株。通过抗体的两两配对,基于荧光量子点作为免疫层析抗体的标记探针,借助免疫层析试纸条双抗夹心法原理,筛选出了适用于免疫层析的两株单克隆抗体,研制了禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)荧光免疫层析检测试纸条[A lateral-flow immunoassay strip with quantum dots(QDs)against AIV,AIV-QD-LFIA],并对该试纸条进行了特异性、敏感性、可重复性及可靠性分析。试验结果显示:本研究所建立的AIV-QD-LFIA试纸条检测禽流感标准抗原H5N1-HK的敏感性达到104 EID50,检测标准抗原H9N2-HK的灵敏度为102 EID50,比商品化的禽流感病毒抗原检测卡灵敏度高100倍,比国家标准实时荧光RT-PCR(rRT-PCR)灵敏度低约100倍;可特异性地检测出H5亚型、H7亚型、H9亚型、H1亚型、H3亚型等A型流感病毒,与IBV、NDV等常见禽呼吸道传染病病原无交叉反应,且经过了国家流感中心标准样本盘的样品测试,特异性强;同时该法具有良好重复性,连续4周检测20个样品重复结果均为阳性;小规模田间试验显示该法用于禽流感病毒的普查监测结果可靠。可见本研究所建立的AIV-QD-LFIA试纸条可满足禽流感病毒快速、高灵敏的检测需求,具有广阔的应用空间。

• 出版日期2019
• 单位武汉轻工大学; 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心; 深圳市检验检疫科学研究院; 江西出入境检验检疫局; 清华大学深圳研究生院