NADH依赖型酶活性检测方法的建立

作者：肖丽霞; 师明磊; 王洋; 张彦; 沈文龙; 李德彬; 赵玉军; 赵志虎

来源：中国生物工程杂志, 2012, (04): 72-75.

DOI：10.13523/j.cb.20120413

• FDH
• NADH
• NAD+
• LeuDH FDH NADH NAD+ LeuDH

目的:建立一种NADH依赖型酶活性检测的方法。方法:将FDH、LeuDH串联克隆到表达载体pET-22b(+)中,转化至E.coli,并向培养液中分别添加去离子水、甲酸胺、三甲基丙酮酸,反应一段时间后,检测NADH的吸光度。同时通过测定氨气的产生判断FDH活性;通过薄层层析检测判断LeuDH活性;比较NADH吸光度测定结果与常规方法结果是否一致。结果:通过测定氨气的产生,证明FDH具有活性;此时NADH吸光度上升亦说明FDH具有活性;两种方法结论一致。薄层层析检测,生成叔亮氨酸,证明LeuDH具有活性;此时NADH吸光度下降亦说明LeuDH具有活性;两种方法结论一致。结论:通过检测菌体内部NA...

• 出版日期2012
• 单位沈阳农业大学; 中国人民解放军军事医学科学院