MultiSite Gateway技术在疟原虫条件性基因打靶载体快速构建中的应用

作者：王各各; 李娇娜; 杜峰; 邓舒; 梁佳元; 曹雅明; 罗恩杰

来源：中国医科大学学报, 2012, 41(12): 1068-1072.

• 疟原虫
• 质粒
• 基因打靶
• MultiSite Gateway技术

目的构建可条件性敲除约氏疟原虫ebl基因的打靶载体。方法以约氏疟原虫基因组DNA为模板,PCR扩增EBL-3U和EBL-5U1、EBL-5U2+EBL.orf同源臂片段,利用MultiSite Gateway技术,完成若干DNA片段的定性重组,构建打靶载体pCHD-EBL-RFT,并对质粒酶切和测序鉴定。PCR扩增约氏疟原虫UIS4-5U片段,置换质粒PbUIS4/flp中原有同源臂,并通过位点特异突变技术,获取AvrII和NheI两种线性化位点,构建插入载体PyUIS4/flp。结果构建出打靶载体pCHD-EBL-FRT和PyUIS4/flp,酶切鉴定和测序分析正确。结论将MultiSite Gateway技术成功地用于疟原虫条件打靶载体的构建,建立了以MultiSite Gateway技术为基础的打靶载体构建体系。

• 出版日期2012
• 单位中国医科大学; 基础医学院