NRF-1基因真核慢病毒表达载体的构建及表达

作者：宋熔; 王程铖; 王强; 王玉姣; 李君良; 赵巍

来源：心脏杂志, 2014, (03): 280-284.

DOI：10.13191/j.chj.2014.03.0042

• NRF-1基因
• 慢病毒表达载体
• H9c2(2-1)细胞
• 心力衰竭 NRF-1 gene
• lentiviral vector
• H9c2(2-1)
• heart failure

目的:构建核呼吸因子-1(NRF-1)基因慢病毒表达载体并包装成重组慢病毒颗粒,感染大鼠心肌细胞H9c2(2-1)后,筛选出稳定上调表达NRF-1的大鼠心肌细胞H9c2(2-1)。方法:利用lipofectAMINE 2000试剂将pLenti6.3-NRF1-IRES2-EGFP质粒与两种包装质粒在293T细胞中包装成重组慢病毒,收集病毒并测定滴度。用重组慢病毒感染大鼠心肌细胞H9c2(2-1),然后用杀稻瘟素(blasticidin)筛选转染阳性细胞。用PCR法鉴定靶细胞基因组中NRF-1基因序列,用QPCR测定转染阳性靶细胞中NRF-1基因表达量。结果:收集的重组慢病毒滴度为5.5×10...

• 出版日期2014
• 单位中国人民解放军第五医院