Sonic hedgehog信号通路参与脂多糖诱导肺微血管内皮细胞表达RACK1

作者：王巾枚; 尤青海^*; 牛成成; 贾丹; 蒋利娟

来源：中华急诊医学杂志, 2018, 27(07): 757-763.

• 脂多糖
• 肺微血管内皮细胞
• 活化的蛋白激酶C受体1
• Sonic hedgehog信号通路
• 急性呼吸窘迫综合征

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)是否影响大鼠肺微血管内皮细胞(rat puhnonary microvascular endothelial cells, RPMVEC)表达活化的蛋白激酶C受体1(protein kinase C receptor 1, RACK1)及Sonic hedgehog(SHH)信号通路对其表达的影响。方法取健康雄性、体质量100～120 g、SPF级SD大鼠,于安徽医科大学第一附属医院呼吸内科实验室,体外培养RPMVEC,免疫细胞化学法检测RACK1蛋白在RPMVEC表达,随机分为:LPS和SAG干预实验:(1)LPS量效组,0.1、1、10 mg/L LPS与RPMVEC孵育8 h; LPS时效组,10 mg/L LPS与RPMVEC孵育0、2、4、8、12、24 h。(2)SAG量效组,0.1、1、10 μmol/L RPMVEC孵育8 h; SAG时效组,1 μmol/L SAG与RPMVEC孵育0、2、4、8、12、24 h。(3) LPS+SAG干预组,10 mg/L LPS预孵育1 h后加入1 μmol/L SAG继续孵育8 h;设空白组、LPS组和SAG组为对照。所有干预结束后Western blot法检测RACK1蛋白表达及RT-PCR法检测GLI-1 mRNA表达,多组变量间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果免疫细胞化学染色法显示RPMVEC表达RACK1。(1) LPS量效组(0、0.1、1、10 mg/L):RACK1蛋白表达量随LPS浓度增加而升高,组间比较:P<0.05;GLI-1 mRNA表达量为(1.109±0.063)、(1.039±0.135)、(0.813±0.066)、(0.770±0.105 ),1 mg/L组与10 mg/L组比较P>0.05,其余组间比较P<0.05;LPS时效组:LPS作用RPMVEC诱导RACK1蛋白自2 h表达上调(0.370±0.010),12 h达最高(1.296±0.048),组间比较差异有统计学意义(F=1 272.204,P<0.05);而GLI-1 mRNA表达自2 h开始下调(0.929±0.007),组间比较差异有统计学意义(F=306.609,P<0.05)。(2)SAG量效组(0、0.1、1、10 μmol/L):RACK1蛋白表达量未见明显变化,组间比较P>0.05,GLI-1 mRNA表达量为(1.109±0.063)、(1.169±0.052)、(3.468±0.128)、(3.434±0.054),0 μmol/L组与0.1 μmol/L组比较,1 μmol/L组与10 μmol/L组比较P>0.05,其余组间比较P<0.05。SAG时效组:SAG作用RPMVEC诱导RACK1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);GLI-1 mRNA表达自2 h上调(3.027 ± 0.065),组间比较差异有统计学意义(F=132.841,P<0.05)。(3) LPS+SAG干预组:LPS+SAG作用RPMVEC表达RACK1蛋白量较LPS组下调(0.831±0.040vs. 1.189±0.149,P<0.05),GLI-1 mRNA较LPS组上调(2.720±0.129vs. 0.796±0.082,P<0.05)。结论 RACK1表达增加参与LPS刺激RPMVEC过程,激活的SHH信号通路可下调LPS诱导RACK1表达。

• 出版日期2018
• 单位安徽医科大学第一附属医院