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摘要
目的 :设计并合成人 8-羟基鸟嘌呤 -DNA糖苷酶 (HOGG1)特异性的锤头状核酶 (hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。初步探讨其在A5 4 9细胞中的瞬时表达效应。方法 :运用计算机软件人工设计并合成核酶基因 (RZ) ,将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA3 1(+)中 ,阳性重组子由BamHI和EcoRI酶切 ,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。大量抽提阳性重组子并在非脂质体转染试剂FuGENE 6的介导下引入人肺腺癌细胞株A5 4 9,RT -PCR(逆转录多聚酶链反应 )法半定量检测转染细胞中HOGG1mRNA表达的改变。结果 :经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA3 .1(+)的BamHI和EcoRI酶切位点之间 ,命名为pcDNA3 .1(+) -RZ。经RT -PCR法检测到转染核酶的靶细胞中HOGG1mRNA表达下降 36 % ,与空白细胞组差异有显著性。结论 :成功合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体。核酶在A5 4 9细胞内对靶基因HOGG1具有抑制其表达的作用。
- 出版日期2005-3-30
- 单位四川大学
