霍乱弧菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因mtlD的克隆表达

作者：梁未丽; 陈保立; 赵萌; 周妍妍; 阚飙

来源：疾病监测, 2014, (03): 219-222.

• 霍乱弧菌
• 甘露醇-1-磷酸脱氢酶
• mtlD Vibrio cholerae
• mannitol-1-phosphate dehydrogenase
• mtlD

目的克隆表达霍乱弧菌甘露醇特异性磷酸烯醇式丙酮酸依赖的磷酸转移酶系统操纵子中的甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因mtlD。方法以测序株N16961染色体为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增mtlD基因,扩增产物经NdeⅠ和XhoⅠ酶切后克隆入表达载体pET-30a。0.1 mmol/L IPTG诱导表达,超声裂解上清经Ni柱亲和层析纯化,比色法测定酶活性。结果 mtlD基因成功克隆入表达载体pET-30a,在宿主菌BL21中诱导表达,利用Ni亲和层析柱获得较高纯度的羧基端带His标签的MtlD蛋白,并具有酶活性。结论表达纯化了有活性的霍乱弧菌甘露醇-1...

• 出版日期2014
• 单位中国疾病预防控制中心传染病预防控制所; 山东省疾病预防控制中心