摘要

目的分离珍稀濒危兰科药用铁皮石斛谷氨酸脱羧酶(GAD)基因并进行生物信息学和表达分析。方法采用RT-PCR和RACE技术获基因cDNA全长;利用生物信息学软件分析蛋白理化性质、结构域和三维建模等分子特性;用DNASTAR 6.0和MEGA 4.0分别进行氨基酸多序列比对和进化树分析;借助实时定量PCR检测基因表达。结果分离到DoGAD基因,cDNA全长1795 bp,编码一条由498个氨基酸组成的多肽,分子量55.90 kD,等电点5.32;DoGAD蛋白不含跨膜域或信号肽,具有谷氨酸脱羧酶和磷酸吡哆醛依赖的脱羧酶结构域(17-443、37-381);DoGAD与植物GADs蛋白一致性为69....