凋亡素基因的原核表达构建与提纯

作者：杨俊文^*

来源：中国现代医学杂志, 2005, (22): 3420-3423.

• 凋亡素基因
• 表达系统构建
• 蛋白提纯

目的构建凋亡素原核表达系统,制备提纯抗原物质凋亡素融合蛋白。方法用PCR的技术,以pcDNA-VP3质粒为模板,扩增出凋亡素VP3基因。将其克隆到原核表达载体pET-DsbA的多克隆位点,构建成凋亡素的高效原核表达载体pET-DsbA-VP3,将该质粒转化到大肠杆菌E.coliBL21(DE3)plysS中,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)对其进行诱导表达,固化Ni离子金属鏊合纯化带6X组氨酸标签的凋亡素融合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析目的蛋白。结果转化有凋亡素基因的原核表达载体pET-DsbA-VP3的大肠杆菌E.coliBL21(DE3)plysS经IPTG诱导,固化Ni离子金属鏊合亲和层析纯化凋亡素融合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳获得分子量为38.3KD的目的蛋白条带。结论凋亡素原核表达载体pET-DsbA-VP3能高效表达出凋亡素融合蛋白。

• 出版日期2005-11-23
• 单位温州医科大学