香菇C_(91-3)菌凋亡相关基因24414功能域片段原核表达载体的构建

作者：张思若; 刘奔; 钟民涛; 张伟; 李星云; 王晓丽; 曹婧; 宁安红; 黄敏

来源：中国微生态学杂志, 2013, (11): 1270-1273.

DOI：10.13381/j.cnki.cjm.2013.11.005

• 香菇C91-3菌
• 原核表达
• 基因克隆
• 蛋白
• pET-32a Lentinula edodes
• Expression
• Gene clone
• Protein
• pET-32a

目的构建高效快速且方便的His-标签原核表达体系,对香菇C91-3凋亡相关基因24414功能域进行克隆。方法根据香菇C91-3凋亡相关基因24414的基因序列,分别设计特异性上下游引物,采用PCR方法,以24414基因序列为模板,扩增出24414基因的功能域序列。并将功能域基因连入pMD19-T Simple Vector克隆载体中,进行蓝白斑筛选,挑选出阳性菌落,提取质粒经双酶切及PCR验证后,进行基因测序。将克隆载体上目的基因连入pET-32a原核表达载体,构建重组质粒。转化入E.coli JM109宿主菌,经双酶切验证后,进一步测序鉴定验证重组质粒。结果 PCR扩增出大小为747 bp的...

• 出版日期2013
• 单位大连医科大学