基于AMPK-mTOR信号通路探讨通心络胶囊通过调节自噬改善高糖环境下H9c2心肌细胞损伤的机制

作者：但俊; 王小梅^*

来源：中药新药与临床药理, 2023, 34(03): 322-327.

DOI：10.19378/j.issn.1003-9783.2023.03.005

• 通心络胶囊
• 糖尿病心肌病
• 氧化应激
• AMPK-mTOR通路
• 自噬
• H9c2心肌细胞

目的 采用高糖诱导H9c2心肌细胞损伤建立糖尿病心肌病(DCM)细胞模型，观察通心络胶囊对H9c2细胞的保护作用并探讨其可能机制。方法 以葡萄糖不同浓度(45、65、75、100 mmol·L-1)及75 mmol·L-1葡萄糖+通心络胶囊不同浓度(20、40、80、160、300μg·mL-1)分别处理H9c2细胞24 h，采用CCK-8法测定细胞存活率。将H9c2细胞分为对照组、模型组(75 mmol·L-1葡萄糖)、通心络胶囊组(75 mmol·L-1葡萄糖+160μg·mL-1通心络胶囊)，给药干预24 h。采用DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)水平；JC-1荧光探针法检测细胞线粒体膜电位；ELⅠSA法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)水平；Western Blot法检测细胞自噬蛋白(P62、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ)及AMPK-mTOR信号通路蛋白的表达。结果 75 mmol·L-1葡萄糖浓度组的H9c2细胞存活率约为70%，采用该浓度建立高糖损伤H9c2细胞模型。与对照组相比，模型组H9c2细胞存活率显著下降(P<0.01),ROS绿色荧光强度显著增强(P<0.01)，线粒体膜电位红/绿荧光强度显著降低(P<0.01),LDH、MDA水平显著升高(P<0.01), P62、 p-mTOR/mTOR蛋白表达显著上调(P<0.01), Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及p-AMPK/AMPK蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型组比较，通心络胶囊各浓度组的H9c2心肌细胞存活率明显提高(P<0.05,P<0.01),ROS绿色荧光强度显著减弱(P<0.01)，线粒体膜电位红/绿荧光强度显著升高(P<0.01),LDH、MDA水平显著降低(P<0.01),P62、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著下调(P<0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及p-AMPK/AMPK蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论 通心络胶囊对高糖环境下的H9c2心肌细胞具有保护作用，可能与其降低氧化应激，通过AMPK-mTOR通路上调细胞自噬水平有关。

• 出版日期2023
• 单位锦州医科大学