东方马脑脊髓炎病毒PCR-DHPLC检测方法的建立与初步应用

作者：郑小龙; 王群; 孙涛; 孙明君; 张晓文; 朱来华; 梁成珠

来源：中国预防兽医学报, 2016, 38(08): 638-641.

• 东方马脑脊髓炎
• 变性高效液相色谱
• RT-PCR
• 荧光定量PCR

为建立检测东方马脑脊髓炎病毒(EEEV)的方法,本研究利用PCR结合变性高效液相色谱技术(DHPLC),针对EEEV NS1基因,设计特异性引物,通过优化反应条件,对核酸扩增产物采用DHPLC进行检测分析,核酸扩增产物形成DHPLC特征峰图,建立了EEEV的PCR-DHPLC快速检测方法。结果显示该方法与其他6种常见马病病毒均无交叉反应,未检测到其他马病病毒的阳性吸收峰,具有较强的特异性;对梯度稀释的标准阳性模板的检测限可达到10拷贝/μL;利用本研究建立的方法与荧光定量RT-PCR对30份临床样品进行检测,两者符合率达100%。本研究建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可以用于EEE的病原学诊断及流行病学调查。

• 出版日期2016
• 单位中华人民共和国山东出入境检验检疫局