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摘要
使用PCR方法从大豆基因组DNA中扩增出大豆油酸脱饱和酶基因fad2-1,连接到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌JM109菌株。测序后,用DNAstar软件进行同源性比对。然后将正确的序列反向克隆到表达载体pBt,并转化农杆菌菌株LBA4404,经双酶切鉴定和PCR扩增检测,获得具有该基因反向序列的农杆菌工程菌,转化烟草无菌苗叶片外植体,经过组织培养和卡那霉素抗性筛选,获得抗性烟草转化植株共75株,PCR扩增出npt-II基因,RT-PCR检测到大豆反义油酸脱饱和酶基因转录产物和GC-MS测定其油酸含量增加而亚油酸含量降低。结果表明,克隆的fad2-1基因为1196bp,基因序列与NCBI中已发表的基因fad2-1序列蛋白质相似性达到96.7%,反义大豆fad2-1基因在烟草基因组中整合表达。
- 出版日期2011
- 单位河南师范大学
