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摘要
目的研究敲低NPHP1基因表达对肾小管上皮细胞特性的影响。方法靶向siRNA干扰技术敲低犬肾集合管上皮细胞(MDCK细胞)NPHP1的表达。实验分为空白对照组、阴性对照组、siRNA干扰组。显微镜下观察细胞形态和迁移能力;实时定量PCR和明胶酶谱法分别检测基质金属蛋白酶2和9(MMP2、MMP9)的mRNA表达和酶活性;实时定量PCR、Western印迹和细胞免疫荧光检测上皮钙黏素(E-cadherin)、β联蛋白(β-catenin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、ZO-1相关核酸结合蛋白(ZONAB)及成纤维细胞标志蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达和分布。结果与对照组比较,靶向siRNA干扰24 h,MDCK细胞迁移能力增强,E-cadherin、β-catenin、ZO-1的mRNA表达下降(均P<0.01),α-SMA、MMP2、MMP9及ZONAB的mRNA表达均升高(均P<0.05);干扰48 h见细胞变梭长形,E-cadherin、β-catenin、ZO-1的蛋白表达均下降(均P<0.01),ZONAB、α-SMA蛋白表达升高(均P<0.05),MMP2、MMP9活性升高(均P<0.01);干扰72 h,可见细胞膜上β-catenin、E-cadherin表达明显减少,呈现断续改变或完全缺失,部分细胞可见α-SMA表达,ZONAB在细胞质和细胞核显著表达。结论敲低NPHP1表达可诱导MDCK细胞发生上皮间质转分化,激活ZO-1/ZONAB信号通路。这些改变可能与Ⅰ型肾单位肾痨肾间质纤维化发生有关。
- 出版日期2017
- 单位中山大学附属第一医院; 中山大学; 福建医科大学
