联合基因靶向治疗对乳腺癌细胞及血管内皮细胞的特异性杀伤作用

作者：姚航; 黄宗海; 厉周; 苏国强; 贺蓉; 高峰; 崔大祥

来源：中华外科杂志, 2007, 45(07): 476-479.

DOI：10.3760/j.issn:0529-5815.2007.07.015

• 乳腺肿瘤
• 血管内皮细胞
• 基因
• 反义寡核苷酸

目的探讨腺病毒介导血管内皮生长因子受体(KDR)启动子驱动的双自杀基因(CDglyTK)联合 survivin 反义寡核苷酸(ASODN)对乳腺癌细胞(MCF-7)及血管内皮细胞(ECV304)的特异性杀伤作用。方法将质粒 pAdEasy-KDR-CDglyTK 在293细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR 的 MCF-7和 ECV304细胞株,同步用 survivinASODN 转染已感染腺病毒的 MCF-7和 ECV304细胞株,观察腺病毒的感染效率和 survivinASODN 的转染情况,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot 免疫印迹法检测 CDglyTK 和 survivin 基因在转基因 MCF-7和 ECV304细胞中的表达,MTT 法测定两者联合应用对细胞的杀伤效应和旁观者效应。结果 SurvivinASODN 可转染重组腺病毒感染的细胞,并且 survivinASODN 的转染率及重组腺病毒的感染率均不受影响,CDglyTK 可在两种细胞中高表达,survivinASODN 可明显降低 survivin 蛋白表达。单一 survivinASODN 基因转染 MCF-7和 ECV304细胞后,细胞存活率为56.4%±3.8%和55.9%±3.6%,与 AdKDR-CDglyTK 基因联用后,随着丙氧鸟苷(GCV)和5-氟胞嘧啶(5-FC)浓度的增加,细胞存活率迅速下降,两者联合作用与单一基因作用相比,差异有统计学意义(P<0.05)。但在 GCV 100μg/ml、5-FC 2000μg/ml 时,联合基因治疗组细胞存活率略低于单用 AdKDR-CDglyTK 组,两者差异无统计学意义(P>0.05)。SurvivinASODN 和 AdKDR-CDglyTK 联合作用在 GCV、5-FC 浓度较低时表现为协同效应,并具有更明显的旁观者效应。结论 KDR 启动子调控的 CDglyTK 融合基因体系和 survivinASODN 基因联合应用对乳腺癌细胞及血管内皮细胞具有显著的特异性杀伤作用。

• 出版日期2007
• 单位上海交通大学; 南方医科大学