大容量天然鼠源核糖体展示单链抗体文库的构建与鉴定

作者：程海卫; 陈一飞; 丁豪杰; 杨怡; 卓洵辉; 郭筱璐; 陈学秋; 杜爱芳

来源：中国兽医学报, 2016, 36(05): 763-777.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2016.05.12

• 核糖体展示
• 天然
• 鼠源
• 基因文库
• 单链抗体

为了构建大容量、天然鼠源核糖体展示(ribosome display,RD)单链抗体(single-chain fragment variant,scFv)文库。通过提取SPF级小鼠脾脏总RNA,反转录为cDNA,利用引物分别扩增鼠抗体的VH、VL和Cκ基因,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,通过Linker((Gly4Ser)3)相互拼接,构建单链抗体scFv基因文库和核糖体展示基因文库;经连接转化,对所构建基因文库进行菌落PCR鉴定和序列测定分析。所构建核糖体展示基因文库库容量约为5.6×1013,基因片段全长大小约为1 100bp,基因文库序列具有较好的完整性和多样性。本试验成功构建了一个大容量、天然鼠源核糖体展示单链抗体文库,为进一步筛选单链抗体奠定基础。

• 出版日期2016
• 单位浙江大学; 动物科学学院