pshuttle-Egr-1-hSmac质粒联合X线照射对乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖的抑制作用

作者：梁硕; 王志成; 李艳博; 郭彩霞; 龚守良; 林承赫

来源：吉林大学学报(医学版), 2014, 40(05): 913-919.

DOI：10.13481/j.1671-587x.20140501

• Smac基因
• Egr-1启动子
• X射线
• 基因-放射治疗
• 细胞凋亡

目的:构建pshuttle-Egr-1-hSmac质粒并转染人乳腺癌MDA-MB-435细胞,观察其抑制肿瘤细胞的辐射增敏作用。方法:转染pshuttle-Egr-1-hSmac质粒的MDA-MB-435细胞经过2Gy X线照射不同时间(4、8、12、24和48h)和0.55.0Gy X线照射后24h收集细胞,采用RT-PCR和Western blotting法检测Smac mRNA及其蛋白表达。将细胞分为对照组、pshuttle质粒组、pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组、2 Gy组、pshuttle+2.0Gy组和pshuttle-Egr-1-hSmac+2.0Gy组,MTT法检测各组细胞增殖;克隆形成实验检测细胞存活能力;AnnexinⅤ-FITC双染法检测细胞凋亡;PI单染法检测细胞周期。结果:对照组和pshuttle质粒组MDA-MB-435细胞中Smac mRNA无表达,而pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组MDA-MB-435细胞Smac mRNA表达水平随时间延长逐渐升高,于24和48h时表达水平最高;经0.55.0Gy X线照射后24hMDA-MB-435细胞Smac mRNA表达水平随照射剂量增加而逐渐增加,在2.0和5.0Gy X线照射后Smac mRNA表达水平最高。pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组4、8、12和24h后Smac蛋白表达水平逐渐升高,24h后表达水平最高。经过0、0.5、1.0、2.0和5.0Gy X线照射后24hSmac蛋白表达水平逐渐升高,尤其以5.0Gy X线照射时表达水平最高。MTT法检测时程效应,2.0Gy、pshuttle+2.0Gy和pshuttle-Egr-1-hSmac+2.0Gy质粒组24、48和72h细胞A490值明显低于对照组(P<0.01);剂量效应,pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组1.05.0Gy X线照射后,MDA-MB-435细胞A490值明显低于0Gy X线照射(P<0.05或P<0.01)。pshuttle-Egr-1-hSmac质粒组细胞存活分数明显低于对照组(P<0.01)。pshuttle-Egr-1-hSmac+2.0Gy组细胞凋亡率明显高于2.0Gy组(P<0.01),G0/G1期和S期细胞百分率明显低于2.0Gy照射组(P<0.01),G2/M期细胞百分率明显高于2.0Gy组(P<0.01)。结论:X线照射能增加pshuttle-Egr-1-hSmac质粒转染的MDA-MB-435细胞有效表达Smac mRNA及蛋白,能抑制细胞存活,且诱导G2/M期阻滞和凋亡增加;Smac基因联合放射治疗可明显增加乳腺癌细胞的放射敏感性。

• 单位
  吉林大学第一医院; 首都医科大学; 公共卫生学院; 吉林大学