黑曲霉中葡萄糖氧化酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

作者：刘虎军; 罗玮; 范新蕾; 余晓斌

来源：食品与生物技术学报, 2013, (06): 615-621.

• 葡萄糖氧化酶
• 黑曲霉
• 异源表达
• 甲醇毕赤酵母 glucose oxidase
• Aspergillus niger
• heterologous expression
• Pichia pastoris

为了提高葡萄糖氧化酶的生产能力,提取和纯化了黑曲霉Aspergillus niger PCTC的基因组DNA,以此为模板进行PCR扩增获得葡萄糖氧化酶基因,经测序,所得基因全长1 772 bp,编码含有589个氨基酸的蛋白质。将目的基因和表达载体pPIC9K连接经电转化导入毕赤酵母GS115中,在甲醇诱导和α信号肽的转运下,将葡萄糖氧化酶分泌到胞外。经G418梯度抗性平板和显色平板的初筛以及摇床复筛,获得了一株产葡萄糖氧化酶活力较高的菌株,该株菌在30℃、180 r/min的培养条件下,经0.5%的甲醇诱导发酵4 d可获得0.342 U/mL的酶活。对该菌株进行了摇瓶产酶条件优化,其最佳发酵条...

• 出版日期2013
• 单位江南大学