叶酸调控DUSP1甲基化对非小细胞肺癌细胞奥西替尼耐药性的影响

作者：贺文娟; 刘立^*

来源：中国肺癌杂志, 2023, 26(12): 881-888.

• 叶酸
• 双特异性磷酸酶1
• 甲基化
• 奥西替尼
• 肺肿瘤
• 耐药性

背景与目的 耐药的产生是肺癌死亡率居高不下的主要原因，本研究旨在探究叶酸（folic acid, FA调控双特异性磷酸酶1(dual specificity phosphatase 1, DUSP1)甲基化对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞奥西替尼（Osi mer t in ib,OSM）耐药性的影响。方法 浓度梯度递增法建立OSM耐药NSCLC细胞株PC9R。将PC9R细胞随机分为对照组、OSM组（5μmol/LOSM）、FA组（60 0n mol/LFA）、甲基化抑制剂地西他滨组（Decitabine, DAC）(10μmol/L DAC)、FA+OSM组（600 nmol/L FA+5μmol/L OSM）和FA+OSM+DAC组（600 nmol/L FA+5μmol/L OSM+10μmol/L DAC）。CCK-8法检测细胞增殖能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Tra n s wel l实验检测细胞侵袭能力。流式细胞术测定分析各组细胞凋亡率。实时荧光定量聚合酶链式反应（rea ltimef luorescencequantitativepolymerasechainreaction,RT-qPCR）法检测细胞DUSP1mR NA的表达水平。甲基化特异性PCR(methylation specific PCR, MSP)检测各组细胞中DUSP1启动子区甲基化状态。Western blot分析各组细胞DUSP1蛋白、DUSP1下游丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）信号通路关键蛋白的表达水平。结果 与对照组相比，OSM组细胞OD450值（48、72 h）、划痕愈合率、细胞侵袭数目、DUSP1表达显著下降（P<0.05），细胞凋亡率、DUSP1甲基化水平、p38 MAPK蛋白表达、细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases, ER K）磷酸化水平显著上升（P<0.05）;DAC组细胞OD450值（48、72 h）、划痕愈合率、细胞侵袭数目、DUSP1表达显著上升（P<0.05），细胞凋亡率、p38M A PK蛋白表达、ER K磷酸化水平、DUSP1甲基化水平显著下降（P<0.05）。与OSM组相比，FA+OSM组细胞OD450值（48、72 h）、划痕愈合率、细胞侵袭数目、DUSP1表达显著下降（P<0.05），细胞凋亡率、DUSP1甲基化水平、p38 MAPK蛋白表达、ERK磷酸化水平显著上升（P<0.05）。与FA+OSM组相比，FA+OSM+DAC组细胞OD450值（48、72 h）、划痕愈合率、细胞侵袭数目、DUSP1水平显著升高，细胞凋亡率、DUSP1甲基化水平、p38 MAPK蛋白表达、ERK磷酸化水平显著降低（P<0.05）。结论 FA可能通过增强DUSP1甲基化抑制DUSP1表达，调控下游MAPK信号通路，进而促进细胞凋亡，抑制细胞侵袭转移，最终减弱NSCLC细胞OSM耐药性。

• 出版日期2023