带核定位信号的RARα与JTV1蛋白相互作用的验证实验

作者：王翀; 王东生; 刘北忠; 郝坡; 刘畅; 金丹婷; 钟梁; 王春光

来源：四川大学学报（医学版）, 2009, 40(03): 382-384+402.

• NLS-RARα
• JTV1
• 酵母双杂交
• 免疫共沉淀
• 蛋白质相互作用

目的通过实验验证带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)与JTV1蛋白之间的相互作用。方法将表达NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白的两种重组表达质粒共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体并共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术在体外验证二者之间的相互作用。结果NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体构建成功,共转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,用抗Myc单克隆抗体进行免疫印迹检测,可以检测到Myc-JTV1蛋白。结论利用酵母双杂交和免疫共沉淀技术验证了NLS-RARα与JTV1间存在相互作用。

• 出版日期2009
• 单位重庆医科大学