基于转录组数据分析的六味地黄方活性组分LWD-b抗补体作用的发现与验证

作者：林颖; 韩露; 高圣乔; 罗丹; 肖智勇^*; 周文霞^*

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2023, 37(03): 168-177.

• 六味地黄方
• 活性组分
• LWD-b
• 补体系统
• 溶血实验
• 转录组数据分析

目的 基于转录组数据分析发现与验证六味地黄方活性组分的抗补体作用，并研究其可能的作用途径。方法 人恶性黑素瘤细胞A375用DMEM/F12高糖培养基培养，分为细胞对照、六味地黄苷糖LW-AFC、寡糖组分CA-30、多糖组分LWB-B和糖苷组分LWD-b组(终浓度均为100 mg·L-1)，培养6 h后用L1000技术采集细胞转录组数据，采用Cosine相似度算法和特征方向法对各组转录组数据进行相似性比对和差异表达分析，采用基因富集分析算法进行KEGG通路富集分析。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定补体通路基因C3和C5 m RNA表达。采用基于补体经典途径的溶血活性实验测定相对溶血率，观察LWAFC,CA-30,LWB-B和LWD-b(终浓度均为1,10和100 mg·L-1)及LWD-b中各主要成分莫诺苷、芍药苷、獐牙菜苷、马钱苷、马钱苷酸和丹皮酚原苷(终浓度均为1和100μmol·L-1)的抗补体活性。采用补体成分(C1q,C2,C3,C4,C5和C9)缺失血清法测定LWD-b的补体作用靶点。结果 转录组数据分析结果显示，LWD-b下调的基因显著富集于补体级联激活通路(P<0.01)，而LW-AFC,CA-30和LWB-B此作用不明显。RT-qPCR结果表明，与细胞对照组相比，LWD-b 100 mg·L-1组补体C3和C5 mRNA表达明显降低(P<0.01)。抗补体活性测定结果表明，与补体组相比，LWD-b各浓度组及LW-AFC 10和100 mg·L-1组相对溶血率均明显降低(P<0.01)，但仅LWD-b组相对溶血抑制率>20%，提示LWD-b具有抗补体活性，LW-AFC,CA-30和LWB-B此作用不明显。LWD-b中主要成分的抗补体活性筛选结果表明，与补体组相比，莫诺苷1和100μmol·L-1组及芍药苷100μmol·L-1组相对溶血率均明显降低(P<0.01)，且相对溶血抑制率均>20%；獐牙菜苷、马钱苷、马钱苷酸和丹皮酚原苷组相对溶血率虽也明显降低(P<0.01)，但其相对溶血抑制率均<20%；提示莫诺苷和芍药苷具有显著抗补体活性，而其余成分抗补体活性较弱。补体成分缺失血清法测定结果表明，分别与补体C1q,C2,C3,C5和C9缺失血清组相比，LWD-b 100 mg·L-1处理后相对溶血率变化均<5%，提示LWD-b降低溶血能力与其作用于上述补体成分相关。结论 基于转录组数据分析发现并验证了六味地黄方活性组分LWD-b具有抗补体激活作用，莫诺苷和芍药苷可能是其发挥该作用的主要活性成分。LWD-b可能通过作用于补体成分C1q,C2,C3,C5和C9发挥作用。

• 出版日期2023
• 单位药物研究所; 南京中医药大学