山羊白细胞介素-4成熟蛋白基因的原核表达及其生物学活性检测

作者：张晓燕; 严若峰; 徐立新; 宋小凯; 李祥瑞

来源：畜牧兽医学报, 2012, 43(10): 1657-1663.

• 山羊
• IL-4
• 表达
• 生物学活性

本研究旨在进行山羊成熟白细胞介素-4的体外表达及重组蛋白生物学活性分析。运用PCR技术以pMD18-T-pGIL-4(pGIL-4为山羊IL-4全序列基因)为模板扩增成熟蛋白(mIL-4)基因,并构建pET-32a(+)-mGIL-4原核表达载体,IPTG诱导目的蛋白表达。使用改进的方法纯化目的蛋白后,采用淋巴细胞转化试验检测重组蛋白对山羊外周血T淋巴母细胞的增殖活性。经测序,mIL-4含339个核苷酸,编码112个氨基酸。表达的重组蛋白约为31.3ku,主要以包涵体形式表达。通过改进纯化方法获得了高纯度的重组蛋白。试验证明,纯化、复性后的重组蛋白能显著刺激山羊外周血T淋巴母细胞的增殖,并表现出一定的剂量依赖性,8μg·mL-1增殖能力最强。本研究为山羊重组白细胞介素-4的规模化生产及作为佐剂的开发应用奠定了基础。

• 出版日期2012
• 单位南京农业大学