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摘要
目的:在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达结核分枝杆菌蛋白MPB64,并鉴定其免疫原性。方法:目的基因MPB64连接到pFastBac载体,获得pFastBac-MPB64质粒转化DH10Bac感受态,通过Tn7转座片段将目的基因转座到Bacmid中,得到Bacmid-MPB64穿梭载体,脂质体包被后转染Sf 9细胞收获P1代病毒,重复转染Sf 9细胞三次获得高滴度的P4代病毒,收集细胞上清通过Q Sepharose FF和Ni亲和层析柱两步层析纯化得到目的蛋白MPB64。纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠并检测血清中抗体滴度,ELISA检测MPB64蛋白刺激脾脏细胞产生IFN-γ的浓度,MTT法检测...
