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摘要
【目的】建立口蹄疫病毒(FMDV)感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸稳定的生产工艺，促进其产业化生产及临床应用。【方法】本研究以胶体金免疫探针结合猪IgG,FMDV结构蛋白(SP)及非结构蛋白(NSP)的表位多肽偶联载体蛋白制备人工抗原，设置两条检测线精准拦截抗体的检测模式，以试纸条特异性及敏感性为评价指标，对胶体金免疫探针用蛋白、试纸拦截用多肽抗原、检测线位置及喷膜缓冲液、金标蛋白保存液、样品垫缓冲液以及样品稀释液等参数进行优化。采用优化后的试纸检测266份田间猪血清样品，并与口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒(LPB ELISA)和3ABC阻断ELISA抗体检测试剂盒(3ABC ELISA)检测结果进行对比，计算该试纸与商品ELISA试剂盒的符合率。【结果】经优化后，口蹄疫感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸生产工艺参数如下：以胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)为免疫探针；选择混合多肽的形式设置拦截线，以非结构蛋白多肽(BSA-NSPs)喷涂T1线，结构蛋白多肽(BSA-SPs)喷涂T2线，以0.1 mol/L Tris-HCl为喷膜缓冲液；以ddH2O含15 mg/mL BSA、13.25 mg/mL Na2HPO4·12H2O、15.9 mg/mL NaH2PO4·2H2O、10%Trition X-100和0.3 mg/mL NaN3为金标蛋白保存液；以0.02 mol/L Na2B4O7·10H2O含10 mg/mL酪蛋白、5%Trition X-100、0.3 mg/mL NaN3为样品垫缓冲液；以生理盐水含1.0%Tween-20为样品稀释溶液。制备的FMDV感染与免疫鉴别诊断及免疫评价二联试纸与3ABC阻断ELISA抗体检测试剂盒的符合率为96.20%,与口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒的符合率为94.36%。【结论】通过对试纸生产工艺的优化，建立了稳定的生产工艺，制备的二联试纸检测线显色清晰可见，肉眼识别度高，试纸的检测特异性和敏感性良好。本研究为该试纸的批量生产和产业化应用奠定了基础，为基层口蹄疫的检测提供了稳定、特异、敏感、准确的检测方法。
