Smac基因的克隆及其对Burkitt's淋巴瘤细胞的促凋亡作用

作者：陆超; 吴升华; 陈吉庆; 赵非; 池霞; 潘晓勤; 费莉; 郭梅; 黄松明; 郭锡熔; 陈荣华

来源：中华儿科杂志, 2005, 43(7): 503-506.

DOI：10.3760/j.issn:0578-1310.2005.07.006

• 载体蛋白质类
• 线粒体蛋白质类
• 伯基特淋巴瘤
• 细胞凋亡

目的克隆人促凋亡基因(second mitochondria-derived activator of caspases,Smac),研究Smac基因转染对Burkitt's淋巴瘤Raji细胞的促凋亡作用.方法从人胚肾293细胞中扩增人Smac基因全长的cDNA;构建含Smac基因全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.1/Smac,并转染人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞;用Western blot测定外源基因的表达;Hoechest 33 258和碘化丙锭双荧光染色,结合激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态;流式细胞仪分析细胞凋亡百分率;比色法测定caspase-3酶活性.结果成功克隆人Smac基因全长cDNA,并构建真核表达载体pcDNA3.1/Smac;转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24 h,可显著诱导Burkitt's淋巴瘤Raji细胞的凋亡,凋亡百分率达(43.7±2.5)%;转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24 h,可显著诱导Raji细胞中caspase-3酶活性上调,吸光度为0.936±0.041,与正常对照组(0.138±0.026)及空载体转染对照组(0.136±0.036)相比,P <0.05.结论转染并表达外源性Smac基因,可显著诱导人Burkitt's淋巴瘤Raji细胞凋亡.其机制可能与caspase-3酶活性上调有关.

• 出版日期2005
• 单位南京医科大学; 南京医科大学第一附属医院; 南京市儿童医院