亲水突变法提高抗VEGFR2单链抗体的体外亲和力

作者：齐海迪; 缪小牛; 张娟; 谷凯; 张斯维; 王旻

来源：药学学报, 2012, (10): 1323-1328.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2012.10.017

• VEGFR2
• 亲水突变
• 亲和力成熟
• 噬菌体展示
• 单链抗体 VEGFR2
• hydrophilic shuffling
• affinity maturation
• phage display
• scFv

为了提高抗VEGFR2单链抗体AK404R的亲和力,本研究采用亲水突变法将AK404R的重链CDR3区进行突变,建立次级突变单链抗体库。利用噬菌体展示技术从次级突变库中筛选具有抗VEGFR2特异性、高亲和力抗体,获得的抗体突变株经大肠杆菌HB2151分泌表达,镍亲和色谱柱纯化,并采用竞争性ELISA法、生物信息学方法分别对其亲和力和结构进行了分析。本研究最终建立了6.4×105的次级突变单链抗体库,其中两株突变株的亲和力有明显提高,两株突变株经分离纯化得到电泳纯的蛋白,竞争性ELISA结果显示突变体WZ01和WZ02的亲和力比亲本提高了3倍;生物信息学方法分析突变体与抗原的作用面增大、契合紧密...

• 出版日期2012
• 单位天然药物活性物质与功能国家重点实验室; 中国药科大学