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摘要
目的 探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号活化在川崎病(KD)患儿Th17/调节性T淋巴细胞(Treg)失衡机制中的作用.方法 急性期KD患儿36例,健康对照组32例.KD患儿分别于IVIG治疗前、后直接取血备检.采用流式细胞术检测Th17细胞、Treg比例及叉头蛋白P3(Foxp3)、IL-10、IL-17A、HIF-1α、磷酸化信号转导和转录活化因子3(pSTAT3)蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测CD4+T淋巴细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88 (MyD88)、受体相互作用蛋白1(RIP1)、IL-17A、RAR相关孤儿受体γt(RORγt)、p300mRNA表达;免疫共沉淀-定量PCR及免疫印迹法检测外周血CD4细胞IL-17A基因组蛋白H3乙酰化、Foxp3蛋白泛素化水平;ELISA检测血浆中IL-1β、IL-6、IL-21、IL-23、TNF-α水平.结果 1.急性期KD患儿Th17细胞比例及IL-17A表达显著上升(t=7.62、9.60,P均＜0.05),Treg细胞比例及转录因子Foxp3、IL-10表达明显降低(t=5.72、6.82、5.83,P均＜0.05),Th17/Treg细胞比值远高于健康对照组(t=12.21,P＜0.05),经静脉用丙种球蛋白(IVIG)治疗后均有明显恢复(t=6.28、8.30、4.75、5.02、3.95、9.39,P均＜0.05).2.急性期KD患儿CD4+T细胞IL-17A基因组蛋白H3乙酰化水平及Foxp3蛋白泛素化水平显著上升[H3:(7.32±2.53)％比(2.60±1.08)％;Foxp3:(42.94±15.91)％比(11.01±3.60)％,t=10.20、11.71,P＜0.05],HIF-1α、RORγt及p300表达亦明显高于健康对照组(t=6.02、6.92、6.01,P均＜0.05),经IVIG治疗后均显著降低[H3:(4.63±2.07)％比(7.32±2.07)％;Foxp3:(26.37±11.58)％比(42.94±15.91)％;t=4.94、5.05、3.40、5.31、4.29,P均＜0.05].其中,HIF-1α表达与IL-17A基因组蛋白H3乙酰化水平、Foxp3蛋白泛素化水平呈正相关(r =0.65、0.52,P均＜0.05).3.急性期KD患儿血浆炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-21、IL-23、TNF-α水平及TLR4表达显著增高(t=11.00、15.18、7.21、11.09、9.09、3.84,P均＜0.05),其下游信号分子MyD88、pSTAT3、RIP1表达亦明显高于健康对照组(t=10.07、5.41、8.13,P均＜0.05),经IVIG治疗后均显著降低(t=7.81、10.59、4.70、6.73、6.49、3.03、6.50、3.63、5.22,P均＜0.05).结论 HIF-1α信号异常活化可能是导致急性期KD患儿Th17/Treg细胞失衡的重要因素之一.
