带核定位信号的RARα与谷氨酸氨连接酶蛋白相互作用的胞内外验证

作者：吴燕; 刘北忠; 王翀; 钟梁; 朱丹; 王春光; 金丹婷

来源：第二军医大学学报, 2010, (05): 468-471.

• 维甲酸受体&alpha
• 核定位信号
• 谷氨酸氨连接酶
• 蛋白质相互作用
• 双杂交系统技术
• 免疫共沉淀 retinoic acid receptor &alpha
• nuclear localization signals
• glutamate-ammonia ligase
• protein interaction
• two hybrid system techniques
• co-immunoprecipitation

目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活细胞内的相互作用;通过构建GLUL及NLS-RARα蛋白标签融合表达载体,共转染至人胚肾HEK293细胞,利用免疫共沉淀技术在细胞外验证它们之间的相互作用。结果 GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色的阳性克隆;GLUL蛋白及NLS-RARα标签融合表达载体构建成功,共同转染至HEK293细胞,采用抗HA多克隆...

• 出版日期2010-5-20
• 单位重庆医科大学