氢对LPS致BV-2小胶质细胞炎症反应的影响及自噬在其中的作用

作者：庄欣琪; 王玉尊; 王瑶琪; 蒋毅; 卢悦淳; 吕国义; 谢克亮; 于泳浩^*

来源：中华麻醉学杂志, 2020, 40(03): 350-354.

• 氢
• 内毒素类
• 小胶质细胞
• 炎症
• 自噬

目的评价氢对LPS致BV-2小胶质细胞炎症反应的影响及自噬在其中的作用。方法体外培养BV-2小胶质细胞, 接种于6孔板或96孔板, 采用随机数字表法分为4组(n=24):对照组(C组)、脂多糖组(LPS组)、富氢液培养基组(H组)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤组(3-MA组)。C组应用10%胎牛血清MEM培养基培养24 h;LPS组加入LPS终浓度1 μg/ml孵育24 h;H组加入LPS终浓度1 μg/ml, 培养基更换为富氢液培养基终浓度0.6 mmol/L孵育24 h;3-MA组加入3-甲基腺嘌呤终浓度2 mmol/L, 其余处理同H组。采用CCK-8法检测细胞存活率;采用ELISA法测定上清液TNF-α、IL-6、IL-10和转化生长因子-β(TGF-β)浓度;采用流式细胞术测定离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)+细胞、Iba-1+CD86+细胞和Iba-1+CD206+细胞百分比;采用Western blot法检测微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、LC3Ⅱ、Bcelin-1和p62表达水平, 并计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果 4组细胞存活率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与C组比较, LPS组、H组和3-MA组TNF-α、IL-6、IL-10和TGF-β浓度升高, Iba-1+细胞、Iba-1+CD86+细胞和Iba-1+CD206+百分比升高, LPS组和3-MA组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin-1表达下调, p62表达上调, H组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin-1表达上调, p62表达下调(P<0.05);与LPS组比较, H组TNF-α和IL-6浓度降低, IL-10和TGF-β浓度升高, Iba-1+和Iba-1+CD86+细胞百分比降低, Iba-1+CD206+细胞百分比升高, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin-1表达上调, p62表达下调(P<0.05), 3-MA组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与H组比较, 3-MA组TNF-α和IL-6浓度升高, IL-10和TGF-β浓度降低, Iba-1+细胞和Iba-1+CD86+细胞百分比升高, Iba-1+CD206+细胞百分比减少, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin-1表达下调, p62表达上调(P<0.05)。结论氢减轻LPS致BV-2小胶质细胞炎症反应的机制与增强自噬, 抑制小胶质细胞活化有关。

• 出版日期2020
• 单位天津医科大学总医院; 天津医科大学第二医院