pEGFP-C_3-insig2融合基因真核表达质粒的构建、表达及其对下游基因的影响

作者：陈科; 莫朝晖; 邢晓为; **安; 杨幼波; 谢艳红

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2007, 23(04): 309-311+316.

DOI：10.3321/j.issn:1007-8738.2007.04.006

• pEGFP-C3-insig2
• 3T3-L1细胞
• 表达

目的构建insig2基因的真核表达质粒,转染3T3-L1细胞并观察对下游脂肪酸结合蛋白(AP2)mRNA、脂联素mRNA表达的影响。方法采用RT-PCR法获取小鼠全长insig2基因,并克隆入真核表达载体pEGFP-C3中。酶切、测序鉴定后,经脂质体转染入3T3-L1细胞,通过荧光显微镜观察及RT-PCR检测其在3T3-L1细胞中的表达及下游基因的变化。结果成功地构建了pEGFP-C3-insig2融合基因的真核表达载体,荧光显微镜观察到pEGFP-C3-insig2融合蛋白在转染的3T3-L1细胞胞质中的表达,insig2基因的转录明显上调。转染后24h、72h较0hAP2 mRNA和脂联素mRNA的转录水平明显下调。结论构建了insig2基因的真核表达质粒,在转染的3T3-L1细胞中insig2的过表达可能影响该细胞的脂肪代谢。

• 单位
  中南大学湘雅三医院; 中心实验室