禽腺病毒4型Fiber2蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备

作者：郭浩然; 贾艳娥; 吉艳红^*; 李郁^*

来源：农业生物技术学报, 2019, 27(10): 1804-1812.

• 禽腺病毒4型(FAdV-4)
• Fiber2蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

自2015年以来,国内鸡(Gallus domesticus)群因禽腺病毒4型(Fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)感染引起的包涵体肝炎、心包积液的病例呈逐年上升趋势。为制备反应原性良好的FAdV-4血清学诊断抗原,本研究根据密码子优化后的FAdV-4 Fiber2全基因合成序列进行了体外扩增,再将其克隆入p Cold表达载体,构建原核表达载体pCold-Fiber2。pCold-Fiber2重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli) PGTf2感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalac toside, IPTG)诱导表达后纯化Fiber2蛋白,用该蛋白免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),成功制备了抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光试验(indirected immunofluorescence assay, IFA)结果表明,抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗体纯化后可与Fiber2蛋白和FAdV-4发生特异性反应,证明Fiber2蛋白具有良好的免疫原性。建立的FAdV-4抗体间接ELISA检测方法显示该方法检测灵敏性为96%,特异性为100%。本研究成功制备了具有良好Western blot和IFA反应原性的多克隆抗体,建立了FAdV-4抗体间接ELISA检测方法,该方法反应特异性好、灵敏度高、操作简单、反应结果稳定可靠,适用于鸡群抗体水平的监测、评估和发现早期隐性感染,为研制FAdV-4的血清学诊断技术和防控该病提供了基础资料。

• 出版日期2019
• 单位中国农业科学院兰州兽医研究所; 动物科技学院; 安徽农业大学; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室