利用TALEN技术在牛胎儿成纤维细胞中敲除Myostatin基因

作者：杨翠翠; 佟慧丽; 马兴红; 杜巍; 刘丹; 杨宇; 严云勤

来源：遗传, 2014, 36(07): 685-690.

DOI：10.3724/SP.J.1005.2014.0685

• TALENs
• 牛
• Myostatin
• 敲除
• 转染

肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因能够负向调节骨骼肌的生长和发育,牛MSTN基因突变会出现"双肌"特征。文章利用转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)靶向敲除牛胎儿成纤维细胞的MSTN基因,获得敲除MSTN基因的细胞系,为制备MSTN基因敲除牛提供材料。构建一对MSTN基因的TALENs真核表达载体,分别采用PEI转染试剂和电穿孔法进行牛胎儿成纤维细胞的转染,测序结果表明TALEN技术可用于敲除牛MSTN基因,利用T7核酸内切酶1(T7E1)检测其突变效率,结果显示电穿孔转染的敲除效率为20.4%。通过有限稀释法,共获得10个MSTN基因敲除的细胞克隆(包括MSTN-/-和MSTN+/-),其靶位点敲除的碱基数分别是1～20不等,部分会出现移码突变。出现移码突变的细胞系可用于MSTN基因敲除的转基因肉牛的制备。

• 出版日期2014
• 单位东北农业大学; 生命科学学院