hVEGF基因转染对人脐静脉内皮细胞生长的作用

作者：李红华; 刘厚奇; 汤淑萍; 熊俊; 汤瑞宝; 胡凯猛

来源：第二军医大学学报, 2004, (10): 1074-1077.

DOI：10.16781/j.0258-879x.2004.10.010

• 人血管内皮生长因子-121
• 真核表达
• 人脐静脉内皮细胞
• 细胞增殖

目的 :构建人血管内皮生长因子 (h VEGF) - 12 1的真核细胞复制表达质粒 ,将 h VEGF1 2 1 基因转染进人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cell,HUVEC) ,通过旁分泌作用来加快其生长速度。 方法 :采用 RT- PCR方法 ,从人胚胎成纤维细胞中克隆 h VEGF1 2 1 前体蛋白全长 c DNA,构建重组真核表达质粒 pc DNA3- h VEGF1 2 1 ,用 Fu GENE6介导转染入HU VEC。收集转染的 HU VEC培养上清 ,用 EL ISA法定量检测 h VEGF蛋白的表达情况 ;绘制细胞生长曲线 ,检测 h VEGF1 2 1促进 HUVEC增殖的生物学活性。设转染 pc DNA3空质粒载体和不转染任何 DNA的 HU VEC做对照。 结果 :(1)成功构建了 pc DNA3- h VEGF1 2 1 真核表达质粒 ,经测序证明基因序列与 Gen Bank中核酸序列一致 ,且插入方向正确 ;(2 )转染细胞瞬时表达 h VEGF蛋白 ,于转染 1d后每 10 4 个细胞每天可分泌 h VEGF蛋白 5 9.95 pg,约为对照组的 10 0倍 ;之后表达水平先快后慢下降 ,于转染 7d后仍较对照组高近 1倍 ;(3)转染细胞生长速度明显加快 ,在转染 3d后细胞数与对照组相比即有显著性差异 (P<0 .0 1) ,细胞倍增时间从对照组的 7d以上缩短为 3d左右。结论 :成功构建了 pc DNA3- h VEGF1 2 1 真核表达质粒 ;该质粒能在 HU VEC中表达有生

• 出版日期2004
• 单位中国人民解放军第二军医大学