牛源无乳链球菌sip蛋白抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

作者：郎景民; 布日额; 孙立杰; 刘娣; 吴金花; 锡林高娃; 刘燕; 史芬芳

来源：中国预防兽医学报, 2011, (01): 37-40.

• 无乳链球菌
• sip基因
• 原核表达
• 间接ELISA Streptococcus agalactiae
• sip gene
• prokaryotic expression
• indirect ELISA

为测定牛源无乳链球菌表面免疫相关蛋白(sip)的抗原性,本实验通过建立间接ELISA方法,对该蛋白的抗原性进行分析及鉴定。根据无乳链球菌sip基因序列,设计一对引物,以临床分离菌株基因组DNA为模板,PCR扩增sip抗原表位优势区编码的基因序列,并将其与原核表达载体pET-30a(+)连接,构建重组质粒pET-sip,转化宿主菌BL21中,经IPTG诱导,获得重组蛋白,western blot分析表明,重组蛋白具有良好的抗原性。以纯化的表达产物作为包被抗原,建立检测无乳链球菌抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为3.125μg/mL,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1...

• 出版日期2011
• 单位内蒙古民族大学; 黑龙江省农业科学院