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摘要
【目的】细胞热漂移测定技术（Cell Thermal Shift Assay， CETSA）是一种检测细胞内药物（配体）和蛋白质（靶标）相互作用的技术，原理是当蛋白质结合药物后，其热稳定性会发生变化，通过测定这种变化去鉴定药物和蛋白之间的相互作用。本文以治疗多发性骨髓瘤的靶向药-帕比司他（Panobinostat）为例，建立基于Western blot和CETSA技术的药物靶蛋白鉴定的标准操作流程。【方法】首先用药物Panobinostat处理培养的K562细胞，然后加热处理细胞，裂解细胞及提取可溶性蛋白，以及用抗靶蛋白的抗体经Western blot定量可溶性蛋白。【结果】经Western blot定量及曲线拟合，成功得到3个蛋白，组蛋白去乙酰化酶（HDAC1）、人突触蛋白（Human syntaxin-4，STX4）以及四三肽重复结构域（Tetratricopeptide repeat domain 38，TTC38），随温度变化的热熔解曲线和恒定温度条件下的药物剂量反应曲线。【结论】研究结果表明HDAC1、STX4及TTC3为药物Panobinostat在K562细胞中的靶蛋白。本研究建立了基于CETSA和Western blot技术，鉴定活细胞中药物靶标蛋白的标准操作流程。实验可在2–3 d内完成。
- 出版日期2023
- 单位中国科学院微生物研究所
