可诱导表达小反刍兽疫病毒P蛋白细胞系的建立

作者：李霆; 李茜; 王娜; 崔贝贝; 仇松寅; 张永宁; 吴晓东; 吴绍强; 韩雪清; 林祥梅^*

来源：中国预防兽医学报, 2018, 40(12): 1173-1176.

• 小反刍兽疫病毒
• P蛋白
• Tet on
• 细胞系

为研究小反刍兽疫病毒(PPRV)磷蛋白(P)的生化功能,本研究通过PCR将PPRV p全长基因扩增后克隆至真核表达载体pcDNA4/TO中,构建了重组质粒pcDNA4/TO-PPRVP。将该质粒转染至已稳定转入pcDNA6/TR质粒的T-REx293细胞中,并用博来霉素和稻瘟菌素筛选存活克隆。将强力霉素添加至存活细胞克隆中诱导P蛋白表达,Western blot及间接免疫荧光试验鉴定出可诱导表达P蛋白的细胞克隆,扩增阳性克隆获得能够稳定表达P蛋白的细胞系。Western blot显示该细胞系表达的P蛋白能够与山羊PPRV阳性血清反应,并能够有效抑制聚肌胞苷酸诱导的STAT1磷酸化,表明该细胞系表达的重组PPRV P蛋白具有与野生型P蛋白类似的生物活性。本研究利用Tet on系统建立了表达PPRV P蛋白的真核细胞系,为深入研究PPRV的致病机制奠定了基础。

• 出版日期2018
• 单位中国检验检疫科学研究院; 中国动物卫生与流行病学中心