APPβ分泌酶切割位点特异性单链抗体的制备和鉴定

作者：黄巍; 周丽荣; 周婷; 孙红霞; 黄晓刚; 刘桥

来源：中国药理学通报, 2012, (03): 337-342.

• 人淀粉样前体蛋白
• β分泌酶
• β分泌酶切割位点
• 单链抗体
• 阿尔采末病
• β淀粉样蛋白 human amyloid precursor protein
• BACE
• β-secretase cleavage site
• single-chain Fv(ScFv)
• Alzheimer's disease
• amyloid-beta peptide(Aβ)

目的制备针对人淀粉样蛋白前体(APP)β分泌酶切割位点的特异性单链抗体(ScFv),并进行鉴定。方法设计扩增单克隆抗体细胞株重链和轻链可变区基因片段VH和VL的引物,利用RT-PCR技术,从本室制备的抗人APPβ分泌酶切割位点单克隆抗体细胞株中扩增出VH和VL基因片段,然后通过重叠引物延伸法(SOE)将VH和VL基因拼接成ScFv基因片段,再将其亚克隆入原核表达载体pET-28a中,转化E.coli BL21(DE3)诱导表达,目的蛋白经镍柱纯化和复性后,用SDS-PAGE、ELISA和Western blot等方法对其检测分析。结果成功从一株抗人APPβ位点单克隆抗体细胞株2H10中扩增出V...

• 出版日期2012
• 单位武汉市医学科学研究所