启动子对枯草芽孢杆菌表达环糊精葡萄糖基转移酶的影响

作者：李云菲; 宿玲恰; 吴敬^*

来源：基因组学与应用生物学, 2019, 38(08): 3540-3547.

DOI：10.13417/j.gab.038.003540

• 环糊精葡萄糖基转移酶
• 枯草芽孢杆菌
• 启动子
• mRNA

以质粒pHY300PLK为骨架构建Bacillus stearothermophilus来源的α/β-环糊精葡萄糖基转移酶(α/β-CGTase)在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)表达系统的表达质粒。为了提高α/β-CGTase的表达量,考察了9个单启动子(PamyQ, PamyQ’, Papr E, Pgsi B, Phpa Ⅱ, Pnpr E, Psrf, Pxyl, Pxyl’)对α/β-CGTase表达量的影响,摇瓶发酵表明最优单启动子为PamyQ’,α/β-CGTase表达量为6.52 U/mL,其次为Phpa Ⅱ和Pnpr E,分别对应酶活5.80 U/mL和5.73 U/mL。用PamyQ’与PamyQ’、Phpa Ⅱ、Pnpr E两两组合,构建双启动子PamyQ’-PamyQ’、Phpa Ⅱ-PamyQ’、Pnpr E-PamyQ’,摇瓶发酵表明最优双启动子为Phpa Ⅱ-PamyQ’,α/β-CGTase表达量为11.15 U/mL,是用单启动子PamyQ’表达时的1.7倍。测定Phpa Ⅱ-PamyQ’、PamyQ’-PamyQ’、PamyQ’-PamyQ’、PamyQ’、Pgsi B、Phpa Ⅱ为启动子时,α/β-CGTase m RNA转录水平,结果表明α/β-CGTase表达量随m RNA转录水平的提高而提高。使用含有启动子Phpa Ⅱ-PamyQ’的表达质粒进行3 L罐发酵,培养96 h时,α/β-CGTase酶活达到最高110.4 U/mL。

• 出版日期2019
• 单位江南大学; 食品科学与技术国家重点实验室; 工业生物技术教育部重点实验室; 生物工程学院