Smad3调控成釉细胞Amelotin启动子转录活性的研究

作者：许针针; 张莉; 王玉敏; 李东亮; 高艳; 高玉光

来源：牙体牙髓牙周病学杂志, 2015, 25(06): 329-334.

DOI：10.15956/j.cnki.chin.j.conserv.dent.2015.06.001

• Smad3
• Amelotin
• EMSA
• 双荧光素酶报告基因检测

目的:研究Smad3对Amelotin启动子转录活性的影响。方法:用基因克隆技术获得含有不同长度Amelotin启动子片段的荧光素酶报告基因载体,然后将其与Smad3瞬时转染小鼠成釉细胞,并用双荧光素酶报告基因检测其活性;生物学信息软件对人和小鼠的Amelotin基因启动子序列的同源性进行BLAST分析;凝胶迁移实验(EMSA)观察Smad3和Amelotin启动子特异性结合位点之间的相互作用;基因定点突变构建Smad3结合位点突变型Amelotin启动子,并用双荧光素酶报告基因检测系统分析Smad3对野生型和突变型Amelotin启动子转录活性的影响。结果:Smad3转染后,Amelotin启动子(-160+196)转录活性明显增强(P<0.05);将人与小鼠的Amelotin启动子序列(-160+196)进行Blast序列比对,发现两序列在(-160-1)具有很大的同源性;EMSA结果显示,Smad3与Amelotin启动子(-160+196)的GTCTG有相互作用;将Amelotin启动子上Smad3结合位点特征性序列"GTCTG"突变为"CCCTG"后,Smad3对突变型Amelotin基因启动子的转录活性无显著影响(P>0.05)。结论:转录因子Smad3可通过与Amelotin启动子特定序列结合而调控Amelotin的基因表达,从而在釉质发育过程中发挥重要作用。

• 出版日期2015
• 单位滨州医学院附属医院; 滨州医学院