朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶真核表达载体构建及在293T细胞中表达条件

作者：韩晶玉; 楼怡宁; 师光禄; 陈青; 彭博; 卜春亚

来源：北京农学院学报, 2015, 30(04): 24-28.

DOI：10.13473/j.cnki.issn.1002-3186.2015.084

• 乙酰胆碱酯酶
• 朱砂叶螨
• 293T细胞
• 转染
• 体外表达

乙酰胆碱酯酶(AChE;EC 3.1.1.7)是神经传导中调节神经递质乙酰胆碱水平的一种关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的主要作用靶标。目前关于朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的真核表达还未见报道。本研究拟构建朱砂叶螨AChE的真核表达载体,进行在293T细胞中表达条件摸索。将朱砂叶螨野生型ace完整读框和去掉3’疏水区的ace基因分别插入到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,经PCR和双酶切鉴定及测序验证后,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/ace。采用GFP报告基因确定在293T细胞中表达条件摸索,结果表明293T细胞的最适转染时间为48h和LipofectamineTM2000转染试剂的最适加样量为20μL。本试验成功构建了朱砂叶螨AChE的真核表达载体,确定了在293T细胞中的表达条件,为后续筛选新型选择性AChE抑制剂奠定了基础。

• 出版日期2015
• 单位北京农学院