炭疽芽胞杆菌mntA基因缺失突变株的构建及鉴定

作者：刁立鹏; 王艳春; 万秀坤; 陶好霞; 袁盛凌; 杨百亮; 刘纯杰

来源：生物技术通讯, 2014, (03): 341-344.

• 炭疽芽胞杆菌
• mntA基因
• 温敏质粒
• 同源重组
• Cre-LoxP系统 Bacillus anthracis
• mntA gene
• thermosensitive plasmid
• homologous recombination
• Cre-LoxP system

目的:通过同源重组的方法敲除炭疽芽胞杆菌减毒AP422株的mntA基因,使菌株进一步减毒,用于构建新的疫苗候选株。方法:利用PCR方法扩增mntA基因上下游同源臂后与温敏质粒连接,构建打靶载体,并转化炭疽芽胞杆菌减毒AP422株;利用抗生素和温度2种选择压力实现同源重组,敲除目标基因mntA,然后利用Cre-LoxP系统去除抗性筛选标记,得到无抗性标记的缺失突变株,并利用PCR和Western印迹等方法对重组菌进行系统鉴定,最后分析突变株的生物学性状。结果:敲除了AP422株的mntA基因,获得了无抗性标记的缺失突变株,突变株的生存竞争能力比原始菌株明显减弱。结论:突变株获得了进一步减毒,可用...

• 出版日期2014
• 单位中国人民解放军军事医学科学院; 天津农学院