蒙古沙冬青干旱胁迫全长cDNA文库构建及序列分析

作者：林清芳; 王学峰; 李记园; 赵鸿彬; 王茅雁

来源：生物工程学报, 2012, 28(01): 86-95.

DOI：10.13345/j.cjb.2012.01.008

• 沙冬青
• 干旱
• cDNA文库
• 序列分析

为了规模化分离强抗逆植物蒙古沙冬青Ammopiptanthus mongolicus(Maxim.)Cheng f.的抗旱基因并探讨其抗旱性分子机理,用SMART(Switching mechanism at 5′-end of RNA transcript)技术构建了其在干旱胁迫下的全长cDNA文库。原始文库滴度为1.6×107PFU/mL,重组率为97.7%,插入片段长度多数接近和超过1 kb。对3 000个阳性克隆进行了5′端测序和序列分析,共获得1 450条Unigene序列。在Nt、Nr和Swissprot等数据库中进行Blast搜索,结果有919条(占63.4%)与已知或推测功能的基因具有同源性,其余531条(占36.6%)为功能未知的新基因。将Unigene进行Gene Ontology(GO)功能分类,其中与生理过程、细胞过程、结合、催化活性和细胞组分相关的基因所占比例较高,其次是与细胞器、蛋白复合体、运输和结构分子活性相关的基因,与刺激应答、基因表达调节、生理生化调节和信号转导相关的基因也占相当比例。许多有功能注释的Unigene属于抗逆相关基因,用半定量RT-PCR方法分析其中6个基因的表达变化,证明其均参与对干旱胁迫的应答反应。为进一步开展表达谱分析和克隆、鉴定抗旱基因奠定了基础。

• 出版日期2012
• 单位内蒙古农业大学; 生命科学学院