重组HBsAg-GFP载体的构建及其在293T细胞中的表达

作者：刘璇; **; 吴砂; 蒋小滔

来源：实用医学杂志, 2013, 29(20): 3304-3306.

DOI：10.3969/j.issn.1006-5725.2013.20.014

• 乙肝表面抗原
• 真核表达
• 转基因鼠
• 绿色荧光蛋白

目的:构建pCMV-HBsAg-GFP真核表达载体,鉴定重组蛋白在293T细胞中的表达及抗原性。方法:以HBV转基因鼠C57BL/6J-TgN(AlblHBV)44Bri基因组DNA为模板扩增HBsAg基因片段,并将其插入到带绿色荧光蛋白标签的真核表达载体pCMV-AC-GFP。通过阳离子聚合物将重组质粒pCMV-HBsAg-GFP转入293T细胞,荧光显微镜观察重组蛋白的表达,ELISA和Western Blotting鉴定其抗原性。结果:1%琼脂糖凝胶电泳结果显示,PCR扩增片段大小符合HBsAg基因699 bp的理论值。重组质粒经PCR、酶切鉴定后也与理论值相符。荧光显微镜显示,转染293T细胞48 h后,约50%呈亮绿色,细胞形态好,荧光表达强度高。ELISA和Western Blotting鉴定结果均为阳性。结论:成功构建了pCMV-HBsAg-GFP真核表达质粒,其表达的重组蛋白与天然HBsAg具有相同的抗原性。

• 出版日期2013
• 单位南方医科大学; 南方医科大学南方医院; 基础医学院