独特型TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体构建及体外表达

作者：李闯; 吴秀丽; 李扬秋; 周羽竝; 陈少华; 杨力建; 朱康儿

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2008, (01): 30-33.

DOI：10.3321/j.issn:1007-8738.2008.01.010

• Jurkat细胞株
• T细胞受体
• 转基因

目的:构建Jurkat细胞株独特型TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体,转染后了解其体外表达情况。方法:根据聚合酶链反应-基因扫描(PCR-Genescan)检测Jurkat细胞株TCR Vα及Vβ亚家族表达情况,分别将其所表达的单克隆性的TCR Vα1及TCR Vβ8亚家族基因片段克隆至质粒pIRES的多克隆位点A(MCS A)和多克隆位点B(MCS B)中。通过限制性酶切分析、序列分析、RT-PCR、间接免疫荧光、流式细胞术(FCM)手段鉴定重组表达载体的正确性以及转染A549和Molt4细胞后基因及蛋白的表达情况。结果:构建了2组TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体,该表达载体转染A549和Molt4细胞后,在mRNA和蛋白水平检测到了TCR Vα1和TCR Vβ8的表达。结论:成功构建了2种独特型Vα1-pIRES-TCR Vβ8真核表达载体,为利用特异性TCR基因修饰T细胞的研究提供方法学依据。

• 出版日期2008
• 单位暨南大学; 生物化学教研室