痘苗病毒辅助的重组丙型肝炎病毒生产体系中生产细胞的选择

作者：舒文; 马强; 董慧敏; 林冠峰; 吴英松

来源：世界华人消化杂志, 2009, (28): 2877-2880.

• 重组丙型肝炎病毒
• 痘苗病毒
• 荧光定量聚合酶链式反应 Hepatitis C virus
• Vaccinia virus
• Fluorescent quantitative PCR

目的:探讨痘苗病毒辅助的重组丙型肝炎病毒制备体系中生产细胞的选择.方法:将已构建好的质粒pT7HCV及pVHCV分别共转染BHK21,HepG2,SMMC7721细胞株,4h后用痘苗病毒感染细胞,96h后用RT-PCR检测HCV的RNA表达,用荧光定量PCR方法检测培养上清中RNA的拷贝数,并用Western blot检测结构蛋白E2以及非结构蛋白NS5的表达.结果:RT-PCR检测到各细胞株培养上清中均有HCV的RNA的存在,定量PCR显示RNA的拷贝数在BHK21,HepG2,SMMC7721细胞中的产量分别为(2.97±0.28)×107,(1.99±0.17)×105,(1.19±0.17)×105(copies/mL).Westernblot检测到在这3种生产细胞中均有HCV非结构蛋白NS5的表达.结论:BHK21,HepG2,SMMC7721细胞株均可生产出重组丙型肝炎病毒颗粒,且以BHK21为生产细胞株时产量最高.

• 出版日期2009
• 单位南方医科大学