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摘要
目的从牛肺中提取基因组DNA,并分析其质量。方法通过单因素试验考察不同NaCl浓度(0.6、0.8、1.0 mol/L)和水解温度(55、75℃)对组织蛋白水解及DNA释放的影响;采用酶解-沉淀法,按照单因素试验确定的酶解条件提取4批牛肺基因组DNA(100221、100301、100305、100322):二步钙盐沉淀法选择性沉淀DNA,获得DNA钙盐,并进行钠置换,获得DNA钠盐。对提取的牛肺基因组DNA进行质量分析,并考察牛肺新鲜程度对DNA终产品分子量的影响。结果 0.6 mol/L NaCl,55℃酶解4 h可保证组织蛋白充分水解及基因组DNA完全释放;经二步钙盐沉淀制备的DNA纯度符合药用标准,但DNA产率不稳定,DNA分子量分布较宽,产率最低的100305批DNA小分子丰度最高;牛肺冻存处理导致DNA分子严重降解。结论采用酶解-沉淀法从牛肺中提取了基因组DNA,对拓宽去纤苷及其类似物的来源具有重要意义。
- 出版日期2014-10-13
- 单位深圳市职业病防治院
