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摘要
背景与目的:蛋白激酶CK2是一种高度保守的第二信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,它与人白血病关系密切,而米托蒽醌是一种临床常用的治疗急性白血病的特效药。本实验观察米托蒽醌对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响,并将其作用于人早幼粒细胞白血病细胞HL-60,探讨它对HL-60细胞的影响。方法:体外将CK2α′和β亚基重组构成CK2全酶,然后加入不同浓度的米托蒽醌与含有[γ-32P]标记ATP的反应混合液处理,CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[32P]放射活度来检测;然后采用台盼蓝拒染法观察米托蒽醌对HL-60细胞毒性,流式细胞术检测药物对细胞周期影响的情况,流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳观察药物处理后细胞凋亡的情况,最后通过使用CK2特异的多肽底物检测药物对细胞内CK2活性的影响。结果:米托蒽醌对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,IC50为0.66μmol/L;进一步分析它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数Ki值为0.25μmol/L;与酪蛋白呈以非竞争性为主的混合性抑制CK2的活性,抑制常数Ki值为0.66μmol/L。它对HL-60细胞有很强的细胞毒性,并能诱导HL-60细胞发生凋亡,但对细胞内CK2活性无明显影响。结论:米托蒽醌是蛋白激酶CK2的有效抑制剂,它能引起HL-60细胞凋亡,但其凋亡机制可能与胞内CK2活性无关。
