柯萨奇病毒A组16型感染性克隆的构建及免疫原性评价

作者：李巨银; 葛君; 马超; 张建辉; 闫伟; 孙娇娇; 李建强^*

来源：中国动物传染病学报, 2023, 1-10.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20230803.001

• 柯萨奇病毒A组16型
• 反向遗传
• 感染性克隆
• 中和抗体

柯萨奇病毒A组16型（CVA16）是引起手足口病流行和暴发的的主要病原体之一，给公共卫生带来严峻挑战。通过体外拯救柯萨奇病毒CVA16 的cDNA感染性克隆，并研究其感染能力、连续传代稳定性和体内免疫原性，为CVA16疫苗的研发提供依据。本研究借助于EGFP报告基因系统，搭建CVA16微基因组平台，为构建CVA16感染性克隆奠定基础。进一步通过反向遗传操作系统拯救出CVA16的感染性克隆，并对该克隆的感染能力、噬斑形态、连续传代稳定性进行观察和验证。最后通过小鼠体内免疫实验评估CVA16感染性克隆的免疫原性。构建的CVA16全长cDNA质粒经限制性内切酶双酶切鉴定，可见约7 500 bp的目的条带和约3500 bp的载体条带，构建的克隆经全基因测序验证与理论序列完全一致。细胞形态学鉴定显示，CVA16组可见典型肠道病毒所致的细胞病变。经细胞连续传代后，CVA16仍呈现持续的感染性，且噬斑形态正常。将其免疫小鼠后，能够刺激机体产生较高滴度的特异性抗体和中和抗体，超离浓缩后的CVA16引起的中和抗体滴度达到原液免疫组的2倍。经反向遗传操作技术获得的CVA16感染性克隆，可在体外稳定传代，并能刺激小鼠产生高滴度中和抗体，具有较强免疫原性，可为深入研究病毒的基因功能、感染机制、致病机理以及疫苗研发奠定基础。

• 单位
  江苏农牧科技职业学院